
Cốt truyện trong phim Rosario to Vampire là câu chuyện xoay quanh về học viện Youkai, đó là một trường nội trú có vẻ bình thường, ngoại trừ việc học sinh của trường là những con quái vật đang học cách chung sống với con người, vì thế mà ngôi trường này không ai để ý đến. Tất cả học sinh đều theo học dưới hình dạng con người và học các môn học bình thường như văn học, thể dục, ngoại ngữ và toán học như những học sinh bình thường khác. Tuy nhiên, có một nguyên tắc vàng ở Học viện Yêu quái tất cả con người được tìm thấy trong khuôn viên trường đều phải bị xử tử ngay lập tức, chính vì thế mà ngôi trường này rất hiếm khi thấy được sự xuất hiện của con người tại đây.
Trong khi đó thì có sự xuất hiện của một nam than niên tên là Tsukune Aono, bản thân anh được biết đến là một thiếu niên bình thường không thể vào được bất kỳ trường trung học nào vì điểm kém. Cha mẹ anh vô tình đăng ký anh vào Học viện Yêu quái như một nỗ lực cuối cùng để đảm bảo việc học của anh và cũng từ đó mà anh phải vào một ngôi trường đặc biệt, nơi và con người không được chào đón. Khi Tsukune vô tình bước vào thế giới mới này, anh đã chạm trán với cô gái hấp dẫn nhất trường, không ai khác đó chính là Moka Akashiya. Quyết định ở lại vương quốc đầy nguy hiểm để tiếp tục mối quan hệ với Moka, anh không nhận ra rằng bên dưới vẻ đẹp của cô là một con quái vật đầy đe dọ một ma cà rồng. Và từ đó mà câu chuyện xoay quanh về nam nhân vật chính Tsukune Aono cùng với những sự kiện diễn ra quanh anh ta cũng được bắt đầu từ đây.