Gia Đình Là Số 1 phần 2 nối tiếp thành công của phần 1 để mang tới cho khán giả những câu chuyện mới đầy hấp dẫn, kết hợp giữa tâm lý, hài hước, tình cảm gia đình cùng nhiều thông điệp ý nghĩa được truyền tải. Gia Đình Là Số 1 phần 2 xoay quanh 2 chị em Shin Se-kyeong (Shin Se-Kyeong) 22 tuổi và Seo Shin-Ae (Seo Shin-Ae) 9 tuổi, 2 người chuyển từ một ngôi làng xa xôi đến thành phố Seoul rộng lớn và phát triển. Họ ngạc nhiên với tất cả những cạm bẫy của cuộc sống đang tồn tại hàng ngày trong một thành phố hiện đại như Seoul. Không lâu sau, hai chị em chuyển đến nhà của ông Lee Sun-Jae (Lee Sun-Jae) và làm người giúp việc cho gia đình ông. Tại đây, 2 chị em đã chứng kiến nhiều điều thú vị xung quanh một gia đình đa thế hệ với mỗi người một tính cách khác nhau.

Lee Sun-Jae nay đã 72 tuổi và ông là giám đốc của một công ty thực phẩm nhỏ. Ông có cậu con trai Lee Ji-Hoon (Daniel Choi) hiện đang là một thực tập sinh y khoa, và cô con gái Lee Hyeong-Kyeong (Hyeon-Kyeong) đang làm giáo viên trung học. Chồng của Lee Hyeong-Kyeong là anh chàng Jeong Bo-seok (Jung Bo-Suk) làm phó chủ tịch công ty thực phẩm của vợ chồng anh. Trong khi đó, Lee Sun-Jae lúc này đang phải lòng phó hiệu trưởng của một trường trung học tên là Kim Ja-Ok (Kim Ja-Ok). Về phần Kim Ja-Ok, cô sống với cô nàng gia sư tiếng Anh tại gia Hwang Jeong-Eum (Hwang Jeong-Eum), và anh chàng giáo viên tiếng Anh điển trai Julian (Julian Kang).